Премикc 2x HS-Taq maxi предназначен для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с флуоресцентными зондами одношаговым методом. В набор входит оптимизированная  2x смесь (14x1.8 мл,  2000 реакций по 25 мкл), состоящая из  Taq ДНК-полимеразы с блокирующими антителами, ПЦР-буфера с дезоксинуклеозидтрифосфатами и стабилизаторов. Набор содержит  пробирки с водой (14x1.8 мл), обработанной диэтилпирокарбонатом. Для проведения реакции необходимо только добавить ДНК-матрицу и праймеры.

 

Премикс  2x HS-Taq maxi рекомендуется  хранить при -20°C, не более 20 циклов замораживания-размораживания. Допускается транспортировка при температуре от 0 до +4ºС не более 3 суток. Срок годности при соблюдении условий хранения и транспортировки – 12 месяцев.

 

После размораживания премикса раствор необходимо тщательно перемешать, несколько раз перевернув пробирку. Затем готовят смесь для ПЦР или ПЦР-РВ следующего состава (на реакцию 25 мкл):

Премикc 2x HS-Taq maxi — 12.5 мкл

Праймеры, при необходимости флуоресцентно меченный зонд до необходимой финальной концентрации (например 500 нМ), вода — 7.5 мкл

ДНК матрица — 5 мкл

Готовую смесь необходимо деликатно перемешать, после чего проводят реакцию ПЦР по следующему протоколу (приведен типовой протокол):

1) денатурация ДНК 95 С         3 мин

2) денатурация ДНК 95 С         10 сек

3) отжиг праймеров 55-65 С     15 сек

4) элонгация 72 С                     20-60 сек (в зависимости от длины ампликона)

стадии 2-4 повторяют 30-45 раз