ОПИСАНИЕ
PEI – полиэтиленимин, это один из наиболее универсальных и оптимальных по соотношению цена/качество катионных трансфицирующих агентов. PEI пригоден для доставки как плазмидной ДНК, так и РНК, а также олигонуклеотидов в разнообразные клеточные линии, в том числе прикрепленные и суспензионные.
ПРИНЦИП ТРАНСФЕКЦИИ С PEI
Нуклеиновая кислота в образует комплекс с катионным полимером PEI. Полученный комплекс нуклеиновая кислота-PEI абсорбируются на поверхности липидной мембраны и далее интернализуется внутрь клетки.
ВАЖНЫЕ ЗАМЕТКИ
Для чего этот метод особенно хорош?
- Для трансфекции клеток в малых объемах (планшеты, небольшие чашки и флаконы)
- Для трансфекции клеток, для которых кальций-фосфатная трансфекция проходит с низкой эффективностью (CHO, HeLa и т.д.)
- Для повышения воспроизводимости трансфекций.
- Для использования в биореакторах и колбах.
Выбрать ли этот метод для трансфекции клеток HEK 293T?
- Для прикрепленных клеток HEK 293T кальций-фосфатная трансфекция даст лучший результат.
- Для суспензионных клеток оптимальна трансфекция PEI, однако требуется оптимизация ростовой среды, так как в ряде сред для культивирования клеток HEK 293T в суспензии трансфекция не проходит.
Какие типы клеток могут быть трансфицированы?
Значительное число клеточных линий хорошо трансфицируется PEI. Функциональность данного набора проверена на следующих клеточных линиях: HEK 293T (адгезионные, суспензионные), CHO (адгезионные, суспензионные), HepG2, HeLa, Sf9 и других. В литературе содержатся сотни упоминаний об использовании PEI для трансфекции самых разных клеточных линий, а также первичных клеток.
Нужно ли менять среду?
Этот метод несколько более токсичен, чем кальций-фосфатная трансфекция, поэтому рекомендуется сменить среду через 4-6 часа.
Можно ли доставлять РНК, олигонуклеотиды и оцДНК при помощи этого подхода?
Да, этот метод подходит для доставки самых разных нуклеиновых кислот в клетки. Может потребоваться оптимизация.