Термостабильная Pfu ДНК-полимераза выделена из E. сoli-продуцента, несущего рекомбинантный ген из Pyrococcus furiosus. Фермент, катализирует матричный синтез ДНК за счет переноса нуклеотида от dNTP на 3' конец молекулы ДНК. Обладает 3'-5' экзонуклеазной активностью, что значительно повышает точность синтеза ДНК по сравнению с Taq ДНК-полимеразой (более чем в 20 раз). Фермент широко применяется в различных приложений, где требуется высокая точность синтеза ДНК. Рекомендуется для клонирования ДНК, методик с использованием мегапраймеров, амплификации фрагментов ДНК с целью последующего секвенирования. Не добавляет на 3' конец ампликона остаток аденина, что позволяет использовать Pfu ДНК-полимеразу для достройки «липких» концов ДНК. Pfu полимераза не включает в ампликон урацил. Максимальная длина амплифицированного фрагмента может достигать 35000 п.н. За одну единицу активности (ед.) принимали количество фермента, необходимое для включения 10 нмолей дНТФ в кислотонерастворимую фракцию за 30 минут при 72°C.

Условия хранения: -20°С

Контроль качества: ПЦР (активность), SDS-PAGE (качество очистки фермента), тест на нуклеазную активность, тест хранения при 25°С, тест на контаминацию E. сoli.

Буфер хранения: 50 mM Трис-HCl (pH 8.2), 0.1 mM ЭДТА, 1 mM ДТТ, 100 mM KCl, 0.1% Nonidet P40, 0.1% Tween 20, 50% глицерол

Реакционный буфер: LSB буфер для фрагментов 1-5 кб, буфер для фрагментов HSB 5-35 кб

Применение:

• Высокоточная ПЦР
• Получение длинных ПЦР-фрагментов
• Достройка «липких» концов ДНК
• Получение зондов и модифицированных ДНК-конструкций

Рекомендуемые условия реакции:

• Используйте 1-4 ед фермента на 100 мкл реакционной смеси
• Конечная концентрация трифосфатов в реакционной смеси – 0.1-0.2 mM
• Стадию элонгации проводить при 72°С, скорость амплификации составляет ~1000 п.о./мин.