Набор для трансфекции ДНК в прикрепленные эукариотические клетки.
Применяется для проведения рутинных процедур трансфекции (временная, стабильная), а также с целью препаративной наработки эукариотических белков и вирусных частич.
- CPT-01/02 набора достаточно для 70 трансфекций в 100 мм чашках;
- Хранить при +4°C.
Кальций-фосфатная трансфекция клеток млекопитающих была предложена сравнительно давно, однако остается одним из наиболее популярных методов для доставки больших доз ДНК в прикрепленные клетки. Этот метод позволяет добиться высоких уровней трансфекции (рутинно до 100%), обеспечивает отличный выход рекомбинантных белков и высокие титры лентивирусных частиц.
Для чего этот метод особенно хорош?
Для трансфекции средних и больших объёмов прикреплённых клеток. В силу особенностей протокола этот метод не рекомендуется к использованию для постановки скрининговых трансфекций (в 48-, 96- и 384-луночных планшетах), однако он дешевле и эффективнее других способов трансфекции для больших форматов, начиная с 12 луночных планшетов и заканчивая клеточными фабриками.
Какие типы клеток могут быть трансфицированы?
Практически любые прикреплённые (адгезионные) клетки, например, HEK293T, CHO, HeLa. Есть сообщения об успешном применении этого метода для трансфекции первичных клеток, в том числе фибробластов и даже нейронов. Для суспензионных клеток этот метод не рекомендуется.
В чем плюсы?
Высокий уровень наработки белков и вирусных частиц, при меньшей стоимости, чем многие другие агенты. Низкая токсичность для клеток.
Сколько времени занимает постановка трансфекции?
Этот метод не требует коинкубации компонентов, сразу после образования смеси её вносят к клеткам. Можно ставить много трансфекций за один раз, а также трансфицировать большие объемы клеток с минимальными трудозатратами.
Нужно ли менять среду?
Через 5-8 часов после постановки трансфекции среду желательно сменить, однако это не является обязательным условием.
Можно ли доставлять РНК при помощи этого подхода?
Не рекомендуется.
Каковы типичные результаты трансфекции при помощи этого набора?
Плазмиды размером 3-6 т.п.н. рутинно трансфицируют 100% клеток HEK 293T, с плазмидами размером 6-10 т.п.н. эффективность достигает ~ 90% на клетках HEK293T. Ниже приведено фото клеток HEK293Т, через 24 часа после трансфекции плазмидой длиной 9 т.п.н., кодирующей GFP на второй позиции в бицистронной кассете.
Также при помощи набора достигаются высокие титры наработки лентивирусных частиц. На графике ниже отображена эффективность трансдукции клеток HEK293T при помощи вирусных частиц, полученных после трансфекции ДНК нашим набором. Агент F – один из наиболее эффективных и популярных липофильных агентов, CaP – набор для кальций-фосфатной трансфекции. При помощи указанных способов были поставлены трансфекции в 6-см чашках, затем через 48 часов 2 или 20 мкл супернатанта были использованы для трансдукции клеток HEK293T. Эффективность трансдукции оценивали по доле GFP+ клеток, так как лентивирусные частицы кодировали EGFP.
