Скачать pdf

Премикc 2x HS-Taq maxi предназначен для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с флуоресцентными зондами одношаговым методом (2000 реакций по 25 мкл). В набор входит оптимизированная  2x смесь (14x1.8 мл), состоящая из  Taq ДНК-полимеразы с блокирующими антителами, ПЦР-буфера с дезоксинуклеозидтрифосфатами и стабилизаторов. Набор содержит  пробирки с водой (14x1.8 мл), обработанной диэтилпирокарбонатом. Для проведения реакции необходимо только добавить ДНК-матрицу, праймеры и зонд.

 

Премикс  2x HS-Taq maxi рекомендуется  хранить при -20°C, не более 20 циклов замораживания-размораживания. Допускается транспортировка при температуре от 0 до +4ºС не более 3 суток. Срок годности при соблюдении условий хранения и транспортировки – 12 месяцев.

 

После размораживания премикса раствор необходимо тщательно перемешать, несколько раз перевернув пробирку. Затем готовят смесь для ПЦР или ПЦР-РВ следующего состава (на реакцию 25 мкл):
•    Премикс 2х HS-Taq — 12.5 мкл
•    Праймеры, при необходимости флуоресцентно меченный зонд до необходимой финальной концентрации (например 500 нМ), вода — 7.5 мкл
•    ДНК матрица — 5 мкл
Готовую смесь необходимо деликатно перемешать, после чего проводят реакцию ПЦР по следующему протоколу (приведен типовой протокол):
1) денатурация ДНК 95°С                                   3 мин
2) денатурация ДНК 95°С                                  10 сек
3) отжиг праймеров 55-65°С                             15 сек
4) элонгация 72°С                                                20-60 сек (в зависимости от длины ампликона)
Стадии 2-4 повторяют 30-45 раз.
Для ПЦР в реальном времени с флуоресцентно меченными зондами используют следующий протокол:
1) денатурация ДНК 95°С                                   3 мин
2) денатурация ДНК 95°С                                  10 сек
3) отжиг праймеров и элонгация 56-62°С        30 сек
Стадии 2-3 повторяют 35-45 раз.